T-vectorは平滑末端を生じる制限酵素で処理したベクターの3'-末端に対して、化学反応あるいは酵素反応的にTを付加することによって調製できる。

Caution alpha型などの校正機能を持つ酵素（e.g. Pfu, KOD）を使わないこと。

☆Protocol!☆

 

 1) 平滑末端になる制限酵素でマルチクローニングサイトの切断を行う。

 2) 完全に切れていることを確認し、適宜回収・精製する。

 3) 0.5 mL容高速遠心チューブを用意する。

 4) 反応系

 　　10μL　　10×PCR Buffer(Mg plus)

 　　20μL　　10 mM dTTP

 　　10μL　　制限酵素で切断したベクター(0.1μg/μL)

 　　59μL　　dH2O

 　　 1μL　　Taq polymerase

 5) mineral oilを重層する。

 6) Thermal Cyclerを用いて、70℃で2時間反応する。

 7) フェノール／クロロホルム抽出を2回行う。

 8) 1/10 vol. 3M 酢酸ナトリウムを加える。

 9) 1 vol. isopropanol(2-propanol)を加える。

 10) 室温に10分間放置

 11) 15,000 rpm, 4℃で10分間遠心

 12) リンス、dry up後10μLのTEに溶解し、小分けして-20℃に保管する。（T-vectorは凍結融解に弱いとの情報があるため、1-2μLずつに小分けして保管する。）
 

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